Resumen: En Uruguay el diagnóstico de rutina de Neospora caninum se realiza fundamentalmente por estudios histopatológicos de los fetos abortados, complementando esta información con resultados de serología y/o Inmunohistoquímica (IHQ). El objetivo de este estudio fue estandarizar un protocolo de amplificación de secuencias mediante PCR (polymerase chain reaction) para la detección de Neospora caninum en órganos de fetos abortados espontáneamente en bovinos para su incorporación a la rutina diagnóstica. Con este propósito se realizó un estudio retrospectivo utilizando muestras congeladas de archivo, de un periodo comprendido entre los años 2013 y 2016, con diagnóstico positivo o negativo a Neospora caninum. Los resultados mostraron que de 31 muestras positivas a Neospora caninum por las técnicas de rutina, 26 fueron positivas por PCR (84%), demostrando una alta sensibilidad de diagnóstico de esta técnica. Todas las muestras con diagnóstico negativo mediante histopatología (n=20) fueron confirmadas como negativo mediante PCR. La comparación de los resultados de PCR con los de histopatología, mediante el test de Cohen’s Kappa, señalaron un acuerdo muy alto (81%, p<0.001) entre ambos diagnósticos. Dichos resultados sumados a la simplicidad y rapidez de la técnica podrían sugerir a la PCR como alternativo de la IHQ como técnica confirmatoria en el diagnóstico de rutina. También permitiría realizar análisis retrospectivos de muestras archivadas, paso fundamental para futuros estudios genéticos de la población de Neospora caninum presente en Uruguay.

Abstract: The diagnosis of Neospora caninum in Uruguay is carried out by histopathological studies of aborted fetuses, complementing this information with serology test and/or immunohistochemistry (IHC) results. The aim of this study was to standardize a protocol of polymerase chain reaction (PCR) to detect of N. caninum in organs of spontaneously aborted bovine fetus. A retrospective study was conducted using frozen samples from a period between 2013 and 2016, with positive or negative diagnosis of N. caninum. Results showed that 26 of 31 samples positives for N. caninum by routine techniques were positive by PCR, demonstrating a high sensitivity of the PCR. All negative samples by Histopathology (n=20) were confirmed as negative by PCR. Cohen's Kappa test indicated a very high agreement (81%, p<0.001) between PCR and Histopathology with serology test and/or immunohistochemistry (IHC) results. The high sensitivity, specificity and simplicity of PCR test suggest this technique as an alternative to IHC as a confirmatory technique in routine diagnosis.

RESUMO: Artrogripose múltipla congênita é relatada pela primeira vez em bovinos Aberdeen Angus (AA) no Uruguai. Num rebanho comercial de 30 vacas a Aberdeen Angus, dois bezerros com graves malformações musculoesqueléticas morreram logo após o nascimento. As vacas foram inseminadas utilizando sêmen importado da Argentina, de apenas um touro de elite de AA. Na necropsia, um dos bezerros apresentava atrofia muscular grave, artrogripose afetando todos os quatro membros e a coluna vertebral, cifoscoliose e torcicolo. A histopatologia demonstrou atrofia muscular com acentuadas variações no tamanho das fibras e abundantes fibras fibroadiposas. O sistema nervoso central apresentava apenas congestão e edema devido à distocia, enquanto os nervos periféricos e o número de neurônios motores na medula espinhal pareciam normais. A análise de DNA confirmou artrogripose múltipla congênita. Concluiu-se que a doença em bovinos Aberdeen Angus se deve a falha na junção neuromuscular.

ABSTRACT: Arthrogryposis multiplex congenita is reported for the first time in the Aberdeen Angus (AA) breed in Uruguay. In a commercial herd of 30 purebred Aberdeen Angus cows, two calves with severe musculoskeletal malformations died at birth. The cows had been inseminated using semen imported from Argentina from one elite AA sire only. At necropsy, one calf showed severe muscular atrophy, arthrogryposis affecting all four limbs and the spine, kyphoscoliosis and torticollis. Histopathology showed muscular atrophy with marked fiber size variation and abundant fibroadipose fibers. The central nervous system only showed congestion and edema due to dystocia, whereas the peripheral nerves and the number of motor neurons in the spinal appeared normal. DNA analysis confirmed arthrogryposis multiplex congenita. It is concluded that disease in Aberdeen Angus cattle is due to failure in the neuromuscular junction.

Resumen: Se describe la epidemiología, clínica y patología de 3 focos (4 casos) del cuadro patológico de Periventriculitis / Coroiditis causado por Histophilus somni diagnosticados en la región Este de Uruguay (2013-2019). Los focos ocurrieron en predios agropecuarios con diferentes sistemas de producción intensivos, incluyendo feedlots, predios ganaderos de recría y tambos. Clínicamente, algunos animales presentaban signos inespecíficos de fiebre y depresión, con decúbito costal y muerte a las pocas horas. En otros casos, los animales presentaron ataxia, temblores, pedaleo, opistótonos y convulsiones. A la necropsia los hallazgos patológicos más significativos en el sistema nervioso central eran de coroiditis y periventriculitis fibrinosupurativa en los ventrículos laterales. Se observó también pericarditis y otras complicaciones fibrino-supurativas a nivel renal (pielonefritis), como consecuencia de la septicemia. En ningún de los casos habían lesiones pulmonares. A la histopatología, en todos los casos había vasculitis leucocitoclástica, trombosis y colonias bacterianas cocoides Gram-negativas en su interior. En dos casos, mediante Inmunohistoquímica, se confirmó la presencia de Histophilus somni en lesiones ventriculares cerebrales y renales, sugiriendo una infección ascendente por las vías urinarias. La histophilosis bovina es una enfermedad que está presente en la región, debiendo considerarse la misma en casos de mortalidad de animales con infecciones multisistémicas en predios intensivos.

Summary: The aim of this paper is to describe three outbreaks (four cases) Leptomeningitis / Ventriculitis /Choroiditis Syndrome (Histophilus somni) occurred in cattle in the eastern region of Uruguay (2013-2019). All cases occurred in feedlots and cattle farms with intensive o semi-intensive production systems. Animals showed fever, ataxia, opisthotonus, seizures, and finally death. At necropsy the main findings were found in the central nervous system and characterized by fibrino-suppurative leptomeningitis, with ventriculitis and choroiditis. Pericarditis and nephritis- pyelonephritis were also found in some cases. No pulmonary lesions were found, in the four animals necropsied. The main histological lesions were found in the periventricular region and characterized by vasculitis, thrombosis with Gram-negative bacterial colonies. In two cases, the presence of Histophilus somni in brain and kidney lesions was confirmed by immunohistochemistry. Bovine histophilosis is a disease present in Uruguay and it should be considered in case of mortality of animals with nervous and multisystemic infections.

Resumen El objetivo de este estudio consistió en un relevamiento de las principales enfermedades hereditarias BLAD, DUMPs y Citrulinemia, en una población representativa de terneras Holando de la región este del Uruguay utilizando el panel GGP-BovineLDv3, así como en el análisis de la frecuencia del alelo mutante de BLAD desde que fue reportado por primera vez en Uruguay. El ADN fue extraído a partir de sangre fresca de 190 terneras Holando de la cuenca lechera de Cerro Largo (Uruguay) y genotipado con el mencionado panel, validando así técnicas previamente utilizadas tales como PCR-RFLP y PCR-secuenciación. Se detectó la presencia del alelo mutante para BLAD en una ternera y se estimó una frecuencia alélica de 0.28 %. Las frecuencias reportadas del alelo BLAD durante los últimos 15 años fueron comparadas, encontrándose una disminución de la misma en los trabajos reportados hasta llegar a cero en 2018, lo cual podría deberse al uso de semen genotipado libre de estas enfermedades durante los últimos años. No se encontraron alelos mutantes para DUMPs ni para Citrulinemia. El uso de paneles de baja densidad sería una herramienta muy útil para establecer estrategias de cría en tambos y monitorear las enfermedades hereditarias en la raza Holando.

Abstract The objective of this study consisted in a screening of the main hereditary diseases BLAD, DUMPs and Citrullinaemia using the GGP-BovineLDv3 panel in a representative population of Holstein heifers of the eastern area of Uruguay, as well as the analysis of BLAD mutant allele frequency since it was first reported in Uruguay in 2003. DNA was extracted from fresh blood of 190 Holstein heifers in the dairy area of Cerro Largo (Uruguay) and genotyped using the above mentioned panel, thus validating previously used techniques, suhc as PCR- RFLP and PCR- sequencing. We detected the presence of the BLAD mutant allele in one heifer, and allele frequency was estimated as 0.28%. Reported frequencies of BLAD allele during the last 15 years were compared and the reported studies revealed that the frequency progressively decreased and fell to zero in 2018, which can be due to the use of genotyped semen free of these diseases during the last years. No mutant alleles were found for DUMPs or Citrulinaemia. The use of low-density panels would be a useful tool to develop breeding strategies in dairly farms and to monitor hereditary diseases in Holstein breed.